আমাদের চারপাশের প্রকৃতির অণুজীব সর্বত্র রয়েছে: মাটিতে, জলাশয়ে, বিভিন্ন বস্তুর পৃষ্ঠে, মানুষ এবং প্রাণীরা তাদের দ্বারা বসবাস করে। এই সব খাদ্য, ওষুধ এবং উৎপাদন লাইনের জীবাণু দূষণের উত্স হিসাবে পরিবেশন করতে পারে। ব্যাকটেরিয়া চাষের জন্য তাদের বৈশিষ্ট্য, চাহিদা এবং বৈশিষ্ট্য অধ্যয়ন করা প্রয়োজন। এটি, পরিবর্তে, বিভিন্ন ওষুধের বিকাশ, রোগের পরীক্ষাগার নির্ণয়, উত্পাদন চুল্লির গণনা এবং আরও অনেক কিছুর একটি গুরুত্বপূর্ণ পদক্ষেপ।
সাধারণ ধারণা
অণুজীববিজ্ঞানে ব্যাকটেরিয়া চাষ বলতে পরীক্ষাগারে বাহিত অণুজীবের চাষ বোঝায়। ফলস্বরূপ, জীবাণুগুলি যেগুলি একটি নির্বাচিত পুষ্টির মাধ্যমে বেড়ে উঠেছে তাদের একটি সংস্কৃতি বলা হয়। সংস্কৃতিগুলি মিশ্রিত হতে পারে যদি সেগুলি বিভিন্ন ধরণের অণুজীব দ্বারা গঠিত হয় এবং বিশুদ্ধ হয় যদি সেগুলি শুধুমাত্র এক ধরণের ব্যাকটেরিয়া দ্বারা প্রতিনিধিত্ব করা হয়৷
যদি পুষ্টিকর হয়শুধুমাত্র একটি কোষ মাঝারি মধ্যে স্থাপন করা হয়, এবং ব্যক্তিদের একটি গোষ্ঠী তার প্রজননের ফলে প্রাপ্ত হয়, তারপর অণুজীবের এই সেটটিকে ক্লোন বলা হয়। একটি ক্লোন যখন খালি চোখে দেখা যায় এমন পর্যায়ে বিকশিত হয়, তখন ব্যাকটেরিয়ার এই সংগ্রহটিকে একটি উপনিবেশ বলা হয়।
সাধারণত বিভিন্ন উৎস থেকে বিচ্ছিন্ন ব্যাকটেরিয়া চাষ একে অপরের থেকে আলাদাভাবে করা হয়। এই ধরনের প্রতিটি পৃথকভাবে বেড়ে ওঠা জীবাণুর গ্রুপকে স্ট্রেন বলা হয়। সুতরাং, যদি এক ধরনের স্ট্যাফাইলোকক্কাস তিনটি উৎস থেকে বিচ্ছিন্ন হয় (অথবা একই পণ্যের বিভিন্ন অংশ, বিভিন্ন ব্যক্তি), তারা এই ধরনের স্ট্যাফাইলোকক্কাসের তিনটি স্ট্রেইনের কথা বলে।
ব্যাকটেরিয়া বৃদ্ধির কারণ
এর মধ্যে রয়েছে বিভিন্ন অ্যামিনো অ্যাসিড, লিপিড, পিউরিন বেস এবং অণুজীবের বিকাশের জন্য প্রয়োজনীয় অন্যান্য যৌগ। কিছু জীবাণু স্বাধীনভাবে তাদের প্রয়োজনীয় পদার্থ তৈরি করতে পারে, অন্যদেরকে তাদের সমাপ্ত আকারে গ্রহণ করতে হবে। নির্দিষ্ট বৃদ্ধির কারণগুলির মধ্যে অণুজীবের চাহিদা অনুসারে, ব্যাকটেরিয়া সনাক্তকরণ এবং পার্থক্য করা হয়। এছাড়াও, এই প্যারামিটারটি পরীক্ষাগার এবং জৈব প্রযুক্তিগত কাজের জন্য একটি পুষ্টির মাধ্যম সঠিক প্রস্তুতির জন্য গুরুত্বপূর্ণ:
- অ্যামিনো অ্যাসিড। ব্যাকটেরিয়া একটি নির্দিষ্ট অ্যামিনো অ্যাসিড বা অ্যাসিড গ্রুপ প্রয়োজন হতে পারে. সুতরাং, ক্লোস্ট্রিডিয়ার জন্য লিউসিন এবং টাইরোসিন প্রয়োজন, স্ট্রেপ্টোকোকির জন্য লিউসিন এবং আরজিনিন প্রয়োজন। যেসব অণুজীবের বৃদ্ধির জন্য বাইরে থেকে অ্যামিনো অ্যাসিডের প্রয়োজন হয় তাদেরকে অক্সোট্রফ বলে।
- পিউরিন এবং পাইরিমিডিন বেস, সেইসাথে তাদের ডেরিভেটিভস (অ্যাডেনাইন, গুয়ানিন এবং অন্যান্য)। তারা অনেকের বৃদ্ধির একটি গুরুত্বপূর্ণ ফ্যাক্টরস্ট্রেপ্টোকক্কাস প্রজাতি।
- ভিটামিন। এগুলি ব্যাকটেরিয়া দ্বারা প্রয়োজনীয় কোএনজাইমের অংশ। সুতরাং, নিকোটিনিক অ্যাসিড, সেইসাথে এর অ্যামাইড, যা NAD এবং NADP-এর অংশ, ডিপথেরিয়া এবং শিগেলা কোরিনেব্যাকটেরিয়া দ্বারা প্রয়োজন। থায়ামিন, পাইরোফসফেটের একটি অবিচ্ছেদ্য অংশ হিসাবে, স্ট্যাফিলোকক্কাস অরিয়াস, নিউমোকোকাস, ব্রুসেলা দ্বারা প্রয়োজনীয়। প্যান্টোথেনিক অ্যাসিড, যা CoA কোএনজাইমের অংশ, টিটেনাস ব্যাসিলি এবং নির্দিষ্ট ধরণের স্ট্রেপ্টোকক্কাসের জন্য প্রয়োজন। সাইটোক্রোম, এবং ফলিক অ্যাসিড, হিমস এবং বায়োটিন যা তাদের গঠন করে, মাইকোব্যাকটেরিয়াম যক্ষ্মা এবং হিমোফিলাস ইনফ্লুয়েঞ্জার জন্য প্রয়োজনীয়৷
পরিবেশের প্রয়োজনীয়তা
ব্যাকটেরিয়া চাষের জন্য কালচার মিডিয়ার শর্ত:
- পুষ্টি। এগুলিতে অবশ্যই পদার্থ থাকতে হবে, তদ্ব্যতীত, সহজে হজমযোগ্য আকারে, অণুজীবগুলিকে খাওয়ানো এবং শক্তি পূরণ করার জন্য প্রয়োজনীয়। এর মধ্যে রয়েছে অর্গানোজেন এবং খনিজ পদার্থ। কিছু অণুজীবের অতিরিক্ত ভিটামিন এবং অ্যামিনো অ্যাসিড প্রয়োজন যা তারা সংশ্লেষ করতে পারে না।
- সর্বোত্তম পিএইচ স্তর। এটি কোষের ঝিল্লির ব্যাপ্তিযোগ্যতাকে প্রভাবিত করে এবং সেই অনুযায়ী, ব্যাকটেরিয়া দ্বারা পুষ্টি শোষণ করার ক্ষমতা। প্রায়শই, pH মান 7, 2-7, 4 স্তরে থাকা উচিত। অনেক অণুজীব তাদের জীবনকালে অ্যাসিডিক বা ক্ষারীয় প্রতিক্রিয়া সহ পণ্য তৈরি করে এবং পুষ্টির মাধ্যমের pH যাতে পরিবর্তন না হয়, এটা অবশ্যই বাফার করা হবে।
- আইসোটোনিক। ব্যাকটেরিয়া চাষের জন্য পুষ্টির মাধ্যমের অসমোটিক চাপের মান একই হওয়া উচিতমাইক্রোবিয়াল কোষের ভিতরে। এটি সাধারণত একটি 0.5% NaCl সমাধানের সাথে মিলে যায়৷
- বন্ধাত্ব। এটি এই কারণে যে বিদেশী ব্যাকটেরিয়ার উপস্থিতি বিশ্লেষণকৃত স্ট্রেনের অধ্যয়নের ফলাফলকে বিকৃত করবে৷
- আর্দ্রতার মাত্রা। এই সূচকটি, মাধ্যমের সামঞ্জস্য সহ, একটি নির্দিষ্ট ধরণের ব্যাকটেরিয়ার জন্য সর্বোত্তম বৈশিষ্ট্য থাকা উচিত৷
- Redox সম্ভাব্য (RH2)। এটি এমন পদার্থের অনুপাত দেখায় যা ইলেকট্রন দান করে এবং গ্রহণ করে, সেইসাথে পুষ্টির মাধ্যমের অক্সিজেন স্যাচুরেশনের মাত্রা দেখায়। অ্যারোব এবং অ্যানেরোবের জন্য, ব্যাকটেরিয়া চাষের শর্তগুলি এই সূচকে কিছুটা আলাদা। অ্যানেরোবিক অণুজীবগুলি RH2 মান 5 এর নীচে এবং বায়বীয় অণুজীবগুলি কমপক্ষে 10-এ সর্বোত্তম পুনরুৎপাদন করে।
- অভিন্নতা। এটা গুরুত্বপূর্ণ যে সংস্কৃতির মাধ্যমটিতে তার পৃথক উপাদানগুলির ধ্রুবক পরিমাণ রয়েছে। উপরন্তু, পরিষ্কার সমাধান পছন্দ করা হয়, যা ফসলের বৃদ্ধি পর্যবেক্ষণ করা বা দূষণ লক্ষ্য করা সহজ করে।
সংস্কৃতি মিডিয়ার প্রকার
অণুজীবের বৃদ্ধির জন্য একটি নির্দিষ্ট মাধ্যমের পছন্দ অনেকগুলি কারণ দ্বারা প্রভাবিত হয়, যার মধ্যে তাদের পুষ্টির বৈশিষ্ট্য এবং অধ্যয়নের উদ্দেশ্য। পুষ্টি মিডিয়ার শ্রেণীবিভাগের অন্তর্নিহিত প্রধান বৈশিষ্ট্যগুলি হল:
1. উপাদান। সাবস্ট্রেট তৈরি করতে ব্যবহৃত প্রাথমিক পদার্থ অনুসারে, তারা আলাদা করে:
- প্রাকৃতিক, যা প্রাণী বা উদ্ভিজ্জ উৎপত্তির পণ্য (যেমন মাংস, দুধ, ফল) থেকে তৈরি এবং মিশ্র চাষের জন্য উপযুক্তফসল;
- আধা-সিন্থেটিক, যেখানে ব্যয়বহুল প্রাকৃতিক খাদ্য পণ্যগুলি অ-খাদ্য পণ্য দ্বারা প্রতিস্থাপিত হয় (উদাহরণস্বরূপ, হাড়ের খাবার, রক্ত জমাট বাঁধা) এবং যা নির্দিষ্ট ধরণের ব্যাকটেরিয়া চাষের জন্য বা তাদের বিপাকীয় পণ্যগুলি থেকে বিচ্ছিন্ন করার জন্য সর্বোত্তম। পরিবেশ;
- সিন্থেটিক, যা রাসায়নিক যৌগগুলির সুনির্দিষ্ট পরিমাণ থেকে তৈরি করা হয়, একটি পরিচিত ধ্রুবক রচনা রয়েছে এবং সহজেই পুনরুত্পাদনযোগ্য৷
2. সামঞ্জস্য (ঘনত্ব)। পরিবেশের পার্থক্য করুন:
- তরল;
- ঘন;
- আধা-তরল।
শেষ দুটি বিশেষ দ্রবণ বা তরল পদার্থ দিয়ে আগর-আগার বা জেলটিন যোগ করে প্রয়োজনীয় ঘনত্ব তৈরি করা হয়। উপরন্তু, ব্যাকটেরিয়া বৃদ্ধির জন্য একটি ঘন পরিবেশ হল জমাট রক্তের সিরাম, আলু, সিলিকা জেল মিডিয়া, ক্যারাজেনান।
৩. যৌগ. এই ভিত্তিতে, পরিবেশগুলি হল:
- সরল, যার তালিকা সংক্ষিপ্ত তা হল মাংস পেপটোন ব্রথ (এমবিবি), হটিঙ্গার ব্রোথ এবং আগর, মিট পেপটোন আগর (এমপিএ), পুষ্টিকর জেলটিন এবং পেপটোন ওয়াটার।
- জটিল, রক্ত, ঘোল, কার্বোহাইড্রেট এবং অন্যান্য পদার্থ যোগ করে সাধারণ থেকে তৈরি।
৪. নিয়োগ। নিম্নলিখিত পুষ্টির মাধ্যমগুলিকে আলাদা করা হয়েছে:
- প্রধান ব্যবহার করা হয় অনেক প্যাথোজেনিক জীবাণু বৃদ্ধিতে (সাধারণত সাধারণ রচনা);
- বিশেষ ব্যাকটেরিয়াগুলিকে বিচ্ছিন্ন এবং চাষ করতে ব্যবহৃত হয় যা সাধারণ স্তরগুলিতে বৃদ্ধি পায় না;
- নির্বাচিত (এগুলিও নির্বাচনী) একটি নির্দিষ্ট ধরণের ব্যাকটেরিয়া বিচ্ছিন্ন করার জন্য উপযুক্ত এবং সংশ্লিষ্ট জীবাণুর বৃদ্ধিকে বাধা দেয় (নির্বাচনশীলতা)মিডিয়াতে নির্দিষ্ট পদার্থ যোগ করে তৈরি করা হয়েছে, যেমন অ্যান্টিবায়োটিক বা লবণ, বা পিএইচ সামঞ্জস্য করে;
- ডিফারেনশিয়াল ডায়াগনস্টিকস এনজাইমেটিক ক্রিয়াকলাপ মূল্যায়ন করে এক ধরণের ব্যাকটেরিয়াকে অন্য থেকে আলাদা করা সম্ভব করে তোলে, উদাহরণস্বরূপ, মাধ্যমের;
- প্রিজারভেটিভের প্রয়োজন হয় প্রাথমিক ইনোকুলেশনের জন্য পরবর্তীতে নমুনা পরিবহনের জন্য, কারণ এগুলি অণুজীবের মৃত্যু রোধ করে, সেইসাথে অন্যান্য ব্যাকটেরিয়ার বৃদ্ধিকে বাধা দেয়।
মিডিয়া প্রস্তুতি
অ্যানরোবিক ব্যাকটেরিয়া চাষের সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ ধাপ হল একটি উপযুক্ত পুষ্টির মাধ্যম তৈরি করা। সর্বোত্তম পরামিতিগুলি নির্বাচন করার পরে, নিম্নলিখিত ধাপগুলিতে এগিয়ে যান:
- একটি বিশ্লেষণাত্মক ভারসাম্যে উপাদানগুলির একটি নমুনা নির্বাচন করে ওজন করা;
- দুই মিনিট জল স্নানে ফুটানো;
- পিএইচ নির্ণয় সূচক কাগজ বা পটেনশিওমিটার দ্বারা;
- তরল এবং গলিত ঘন মিডিয়ার জন্য ভেজা কাপড় বা কাগজের ফিল্টার এবং আগর মিডিয়ার জন্য তুলো-গজ ফিল্টারের মাধ্যমে পরিস্রাবণ;
- 3/4 ক্ষমতার উপর বোতলজাত করা হয়েছে;
- মধ্যম নির্ভরশীল নির্বীজন;
- বন্ধ্যাত্বের জন্য নিয়ন্ত্রণ একটি থার্মোস্ট্যাটে দুই দিনের জন্য সেটেল করার মাধ্যমে বাহিত হয়, তারপরে দেখা হয়;
- রাসায়নিক নিয়ন্ত্রণ পিএইচ এবং প্রয়োজনীয় বিষয়বস্তু স্থাপন করতেআইটেম;
- ট্রায়াল ইনোকুলেশন দ্বারা জৈবিক নিয়ন্ত্রণ।
70 ডিগ্রি সেলসিয়াসে উত্তপ্ত পাতিত জলে দ্রবীভূত করা হয় এবং ফসফেট, মাইক্রো- এবং ম্যাক্রোসল্ট আলাদাভাবে দ্রবীভূত হয়;
কাচপাত্র এবং মিডিয়া জীবাণুমুক্তকরণ
ব্যাকটেরিয়া চাষের মৌলিক নীতিগুলির মধ্যে একটি হল বন্ধ্যাত্ব। বিদেশী অণুজীবগুলির বৃদ্ধি এবং বিকাশ তার রাসায়নিক গঠন এবং পিএইচ পরিবর্তন করে পুষ্টির মাধ্যমের বৈশিষ্ট্যগুলিকে প্রভাবিত করতে পারে। নির্বীজন ক্রমবর্ধমান বিশুদ্ধ সংস্কৃতির প্রধান শর্ত। অনুশীলনে, এই শব্দটির অর্থ পৃষ্ঠের এবং জীবাণুমুক্ত বস্তুর আয়তনে একেবারে সমস্ত প্রাণের বিনাশের পদ্ধতি। অধ্যয়নের সময় ব্যবহৃত জাহাজ, যন্ত্র, মিডিয়া এবং অন্যান্য আইটেমগুলি জীবাণুমুক্ত করা হয়৷
কিছু ধরনের জীবাণুমুক্তকরণ:
- ইগনিশন। বীজ বপনের জন্য লুপ এবং সূঁচের জীবাণুমুক্তকরণ, কাচের স্লাইড, কিছু যন্ত্র একটি বার্নার বা স্পিরিট ল্যাম্প ব্যবহার করে সঞ্চালিত হতে পারে।
- ফুটন্ত। সিরিঞ্জ, সূঁচ, খাবার পরিচালনার জন্য উপযুক্ত, কিন্তু ব্যাকটেরিয়া স্পোর মারবে না।
- শুকনো তাপ নির্বীজন। এটি একটি বিশেষ শুকানোর ক্যাবিনেটে বাহিত হয় এবং ফ্লাস্ক, টেস্ট টিউব এবং অন্যান্য পরীক্ষাগারের কাচের পাত্র প্রক্রিয়াকরণের জন্য উপযুক্ত৷
- বাষ্প নির্বীজন। একটি অটোক্লেভ বাহিত, এই পদ্ধতি অত্যন্ত কার্যকর. কিন্তু প্রোটিন বা উচ্চ তাপমাত্রায় ভেঙ্গে যায় এমন অন্য কোনো যৌগ ধারণকারী পুষ্টির মিডিয়ার জন্য এটি উপযুক্ত নয়। আরও স্পেয়ারিংকে টাইন্ডালাইজেশন বলা যেতে পারে। এটি কোচ বয়লারে সঞ্চালিত হয় এবং বীজের অঙ্কুরোদগমকে তাদের ধ্বংসের সাথে একত্রিত করে।
- পাস্তুরাইজেশন। এটি মিডিয়ার জন্য ব্যবহৃত হয় যা সিদ্ধ করার সময় তাদের বৈশিষ্ট্য পরিবর্তন করে (উদাহরণস্বরূপ, দুধ, ওয়াইন, বিয়ার), সক্ষমতাদের অ-স্পোর-বহনকারী অণুজীব থেকে মুক্তি দেয়। প্রক্রিয়াকরণ তাপমাত্রা পনের থেকে ত্রিশ মিনিটের জন্য মাত্র 50-60 ° সে. কিছু ক্ষেত্রে, ঠান্ডা নির্বীজন ব্যবহার করা হয়, ফিল্টার বা UV রশ্মি ব্যবহার করে করা হয়।
ব্যাকটেরিয়া চাষের শর্ত
ব্যাকটেরিয়ার বৃদ্ধি এবং বিকাশ শুধুমাত্র নির্দিষ্ট কিছু কারণ এবং তাদের প্রতিটির মান দ্বারা সম্ভব:
1. তাপমাত্রা। ব্যাকটেরিয়াগুলির তিনটি গ্রুপ রয়েছে যা তাপমাত্রা পছন্দগুলির মধ্যে পৃথক:
- থার্মোফাইল, বা তাপ-প্রেমী জীবাণু, 45-90 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় বৃদ্ধি পায়, যার মানে তারা মানুষ এবং প্রাণী জীবের মধ্যে সংখ্যাবৃদ্ধি করে না;
- সাইক্রোফাইলস, বা ঠান্ডা-প্রেমী অণুজীব, 5-15 ডিগ্রি সেলসিয়াসের মধ্যে তাপমাত্রা পছন্দ করে এবং কোল্ড স্টোরে জন্মায়;
- মেসোফাইলস, 25-37 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় বিকশিত হয়, তারা বেশিরভাগ ব্যাকটেরিয়া অন্তর্ভুক্ত করে।
2. আলো. এটি ফটোট্রফিক ব্যাকটেরিয়া চাষের একটি বৈশিষ্ট্য, যেহেতু তারা সালোকসংশ্লেষণ প্রক্রিয়াটি চালায়। কিন্তু বেশিরভাগ জীবাণুর জন্য, আলো একটি পূর্বশর্ত নয়। এমনকি এর বিপরীতে, সৌর অতিবেগুনি তাদের বিকাশকে দমন করতে পারে৷
৩. জল. সমস্ত অণুজীবের একটি অ্যাক্সেসযোগ্য (তরল) আকারে জল প্রয়োজন। তাই হিমায়িত খাবারে ব্যাকটেরিয়া বৃদ্ধি পায় না।
৪. পরিবেশের অম্লতা। ব্যাকটেরিয়া চাষের এই নীতিটি ইতিমধ্যে উপরে বিস্তারিত আলোচনা করা হয়েছে৷
৫. বায়ুচলাচল। অক্সিজেন, একটি রাসায়নিক উপাদান হিসাবে, জলের একটি অবিচ্ছেদ্য অংশ এবং যথেষ্ট পরিমাণে যৌগ ব্যবহৃত হয়অণুজীবের চাষ। গ্যাসীয় অক্সিজেন দ্রবীভূত আকারে জল এবং অন্যান্য তরলগুলিতেও থাকতে পারে। ব্যাকটেরিয়া একটি উল্লেখযোগ্য অংশ অক্সিজেন অণু একটি ধ্রুবক সরবরাহ প্রয়োজন. তবে বেশ কয়েকটি অণুজীবের জন্য, এটি অপ্রয়োজনীয়, বা আরও খারাপ, বায়বীয় অক্সিজেন তাদের জন্য বিষাক্ত, কারণ তাদের ক্যাটালেস এবং পারক্সিডেস নেই, যা বিষাক্ত শ্বাসযন্ত্রের পণ্যগুলিকে ধ্বংস করে। অতএব, অ্যানেরোবিক ব্যাকটেরিয়া চাষের সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ পদক্ষেপ হল পুষ্টির মাধ্যম থেকে O2 অণু অপসারণ করা৷
6. অণুজীবের চাষ। অ্যারোবিক এবং অ্যানেরোবিক ব্যাকটেরিয়া চাষ পরিবেশের বিভিন্ন স্তরে এবং বিভিন্ন মোডে সঞ্চালিত হয়।
বায়ুবিক অণুজীবের চাষ
অ্যারোবিক ব্যাকটেরিয়া চাষের জন্য আণবিক অক্সিজেন প্রয়োজন। ওষুধ এবং খাদ্য শিল্পে সফলভাবে ব্যবহার করা যেতে পারে এমন অ্যারোবের বিশুদ্ধ সংস্কৃতি পেতে, নিম্নলিখিত পদ্ধতিগুলি ব্যবহার করা হয়:
- অক্সিজেন সরাসরি বাতাস থেকে আসলে ঘন মিডিয়াতে বা তরল মিডিয়াতে (তাদের পাতলা স্তর) বৃদ্ধি পায়;
- তরল মিডিয়াতে গভীর চাষ, যখন তাদের মধ্যে দ্রবীভূত অক্সিজেনের পরিমাণ বৃদ্ধি পায় ধ্রুবক বায়ুচলাচলের মাধ্যমে।
অ্যানরোবিক অণুজীবের চাষ
এই ধরণের ব্যাকটেরিয়া চাষের মূল নীতি হল বায়ুমণ্ডলীয় অক্সিজেনের সাথে তাদের ন্যূনতম যোগাযোগ। তাদের বৃদ্ধির জন্য শর্ত সরবরাহ করা অ্যারোবের তুলনায় অনেক বেশি কঠিন। নিম্নোক্ত পদ্ধতিগুলি আণবিক O2:
থেকে অ্যানেরোবকে বিচ্ছিন্ন করতে ব্যবহৃত হয়
- শারীরিক। অ্যানেরোবিক ব্যাকটেরিয়া চাষের এই পদ্ধতিটি একটি বিশেষ ভ্যাকুয়াম যন্ত্রপাতি - একটি মাইক্রোঅ্যানেরোস্ট্যাটে তাদের চাষে হ্রাস করা হয়। এর মধ্যে বায়ু 10% হাইড্রোজেন এবং 5% কার্বন ডাই অক্সাইড যোগ করে নাইট্রোজেনের একটি বিশেষ গ্যাসের মিশ্রণ দ্বারা প্রতিস্থাপিত হয়।
- রাসায়নিক। এর মধ্যে রয়েছে: শোষণকারী এজেন্টের ব্যবহার (যেমন Fe, Na2S2O4, CuCl) বা হ্রাসকারী এজেন্ট (যেমন অ্যাসকরবিক অ্যাসিড)।
- জৈবিক। এটি একটি বদ্ধ পদ্ধতিতে অ্যারোব এবং অ্যানেরোবের সহ-চাষে নেমে আসে। ব্যাকটেরিয়া চাষের এই পদ্ধতিতে একটি পেট্রি ডিশের অর্ধেক বায়বীয় প্রজাতির ব্যাকটেরিয়া দিয়ে বীজ বপন করা হয় এবং বাকি অর্ধেক অধ্যয়ন করা অ্যানারোব দিয়ে। সমস্ত অক্সিজেন ব্যবহার করার মুহুর্তে এটির বিকাশ শুরু হবে৷
নিম্নলিখিত বীজ বপন পদ্ধতিগুলি অ্যানারোবিক ব্যাকটেরিয়া চাষের জন্য উপযুক্ত:
- পৃষ্ঠের স্তরে;
- জীবাণুমুক্ত প্যারাফিনে ভরা পৃষ্ঠের স্তরে;
- একটি ঘন পুষ্টির মাধ্যমের পুরু মধ্যে;
- ভিসকাস মিডিয়ার গভীর স্তরে।
শুদ্ধ সংস্কৃতি অর্জন
অণুজীববিদরা সাধারণত বিভিন্ন ধরণের জীবাণু দ্বারা বসবাসকারী নমুনা নিয়ে কাজ করেন। যাইহোক, অণুজীবের (পরিবার, বংশ, প্রজাতি) পদ্ধতিগত অবস্থান নির্ধারণের পাশাপাশি তাদের বৈশিষ্ট্যগুলি অধ্যয়ন করার জন্য, তাদের বিচ্ছিন্ন করা এবং একটি বিশুদ্ধ সংস্কৃতি গড়ে তোলা প্রয়োজন। অনেক খাদ্য শিল্পে এগুলি অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ, উদাহরণস্বরূপ, পনির, রুটি, কেভাস, ওয়াইন ইত্যাদি। ল্যাকটিক অ্যাসিড ব্যাকটেরিয়া চাষের ফলে এটি পাওয়া সম্ভব হয়।গাঁজানো দুধের পণ্য, ময়দা, কোকো, সাইলেজ এবং এমনকি প্লাস্টিক উৎপাদনের জন্য একটি অপরিহার্য উপাদান।
একটি ঘন মাধ্যমে বিশুদ্ধ সংস্কৃতিকে বিচ্ছিন্ন করার পদ্ধতিটি তাদের পরবর্তী বিচ্ছিন্ন চাষের সাথে অণুজীব কোষগুলির যান্ত্রিক বিভাজনের উপর ভিত্তি করে। নমুনা একটি জীবাণুমুক্ত ভলিউম জল বা স্যালাইনে স্থানান্তরিত হয় (ভলিউম 10-100 মিলি) এবং তারপর দুই মিনিটের জন্য ঝাঁকান। অধ্যয়নের অধীনে উপাদানের বেধে অবস্থিত অণুজীবগুলি বের করার জন্য (উদাহরণস্বরূপ, সসেজ বা পনির), প্রথমে বালি দিয়ে জীবাণুমুক্ত যন্ত্র দিয়ে নমুনার টুকরোগুলি ঘষে সঞ্চালিত হয়। যে উপাদানটি প্রাথমিক প্রস্তুতির মধ্য দিয়ে গেছে, 1 গ্রাম বা 1 মিলি আয়তনের ওজন, 10, 100, 1000, ইত্যাদি বার জীবাণুমুক্ত জল দিয়ে মিশ্রিত করা হয়। পাতলা করার ডিগ্রীটি বেছে নেওয়া হয়েছে যা পদ্ধতির ক্ষমতার সাথে সম্পর্কিত কোষগুলির ঘনত্ব দেয়৷
অণুজীবের পরবর্তী চাষ হল একটি পুষ্টির মাধ্যম প্রস্তুত করা। সাধারণত একটি ঘন মাধ্যম (MPA) বেছে নেওয়া হয়। এটি প্রথমে গলিত হয় এবং 45-50 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ঠান্ডা হয়, এবং শুধুমাত্র তারপরে এটি বেশ কয়েকটি পেট্রি ডিশে (তিন থেকে পাঁচ টুকরা) ঢেলে দেওয়া হয়, যার নীচে বিভিন্ন ঘনত্বের পরীক্ষামূলক পদার্থ থেকে সোয়াবগুলি স্থাপন করা হয়। এর পরে, এখনও হিমায়িত না হওয়া পুষ্টির মাধ্যম এবং এতে প্রবর্তিত উপাদানের মিশ্রণ করা হয়। সাবস্ট্রেটের আয়তনের বিভিন্ন বিন্দুতে কোষগুলিকে এভাবেই স্থির করা হয়।
পরে, পেট্রি ডিশগুলিকে 22 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 2 দিনের জন্য থার্মোস্ট্যাটে রাখা হয়। এই সময়ে, কোষগুলি এমন পরিমাণে বৃদ্ধি পায় যে প্রতিটি কোষ দ্বারা গঠিত কলোনি খালি চোখে দৃশ্যমান হয়। তাদের প্রতিটি কোষ থেকে ব্যাকটেরিয়া ধরনের একটি বিশুদ্ধ সংস্কৃতিগোলাপ।
এর পরে, পেট্রি ডিশ থেকে, অণুজীবগুলি একটি পুষ্টির মাধ্যমে ভরা পৃথক টেস্টটিউবে উপসংস্কৃতি করা হয়। এইভাবে, বিশুদ্ধ সংস্কৃতিগুলি মিশ্র নমুনা থেকে বিচ্ছিন্ন হয়। এই পদ্ধতিটি এর বিকাশকারীর নাম বহন করে - আর. কোচ। এটিকে সাধারণত কাপ পদ্ধতি বা ডেলিটিং বপনও বলা হয়। বিভিন্ন ধরনের ব্যাকটেরিয়ার বিশুদ্ধ কালচার পাওয়ার পর তাদের আকৃতি, স্পোর এবং পরিবার নির্ধারণ করা হয়।
সমস্ত কাজ অবশ্যই অ্যাসেপসিসের নীতি অনুসারে সম্পন্ন করতে হবে। অণুজীবের অকাল বিকাশ এড়াতে, নমুনা নেওয়ার পরে অবিলম্বে অধ্যয়ন করা উচিত। প্রথম অংশগুলি নিষ্কাশন করার পরে ট্যাপের জল বিশ্লেষণ করা হয়, কারণ এতে পাইপ এবং ট্যাপে জমে থাকা জীবাণু থাকতে পারে। ফল, বেরি এবং শাকসবজির মাইক্রোফ্লোরা মূলত পৃষ্ঠের (খোসা) উপর অবস্থিত, অতএব, এটি থেকে ধোয়া সঞ্চালিত হয়। এটি করার জন্য, ভ্রূণটিকে একটি জীবাণুমুক্ত পাত্রে রাখুন এবং প্রয়োজনীয় পরিমাণ জল দিয়ে এটি পূরণ করুন। তারপর তারা বেশ জোরেশোরে ঝাঁকান এবং জল অন্য পাত্রে ঢেলে দেওয়া হয়। কাপড়ের দ্রব্য থেকে ফসলও swabs প্রাপ্ত করা হয়, কিন্তু আগে, একটি নির্দিষ্ট আকারের টুকরা কাটা হয়.
