অজৈব এবং জৈব মাধ্যমে আলোর শোষণ এবং আরও পুনঃ নির্গমন হল ফসফরেসেন্স বা প্রতিপ্রভের ফলাফল। ঘটনার মধ্যে পার্থক্য হল আলো শোষণ এবং স্রোতের নির্গমনের মধ্যে ব্যবধানের দৈর্ঘ্য। ফ্লুরোসেন্সের সাথে, এই প্রক্রিয়াগুলি প্রায় একই সাথে ঘটে এবং ফসফোরেসেন্সের সাথে, কিছুটা বিলম্বের সাথে।
ঐতিহাসিক পটভূমি
1852 সালে, ব্রিটিশ বিজ্ঞানী স্টোকস প্রথম ফ্লুরোসেন্স বর্ণনা করেন। তিনি ফ্লুরস্পারের সাথে তার পরীক্ষার ফলাফল হিসাবে নতুন শব্দটি তৈরি করেছিলেন, যা অতিবেগুনী আলোর সংস্পর্শে আসার সময় লাল আলো নির্গত করে। স্টোকস একটি আকর্ষণীয় ঘটনা উল্লেখ করেছেন। তিনি দেখতে পেলেন যে ফ্লুরোসেন্ট আলোর তরঙ্গদৈর্ঘ্য উত্তেজনা আলোর চেয়ে সবসময় বেশি।
অনুমানকে নিশ্চিত করার জন্য 19 শতকে অনেক পরীক্ষা-নিরীক্ষা করা হয়েছিল। তারা দেখিয়েছে যে অতিবেগুনী রশ্মির সংস্পর্শে এলে বিভিন্ন নমুনা ফ্লুরোস হয়। অন্যান্য উপাদানের মধ্যে রয়েছে, স্ফটিক, রজন, খনিজ পদার্থ, ক্লোরোফিল,ঔষধি কাঁচামাল, অজৈব যৌগ, ভিটামিন, তেল। জৈবিক বিশ্লেষণের জন্য রঞ্জকের প্রত্যক্ষ ব্যবহার শুরু হয়েছিল শুধুমাত্র 1930
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির বিবরণ
20 শতকের প্রথমার্ধে গবেষণায় ব্যবহৃত কিছু উপকরণ অত্যন্ত নির্দিষ্ট ছিল। সূচকগুলির জন্য ধন্যবাদ যা বৈপরীত্য পদ্ধতি দ্বারা অর্জন করা যায়নি, ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি পদ্ধতি জৈব চিকিৎসা এবং জৈবিক গবেষণা উভয় ক্ষেত্রেই একটি গুরুত্বপূর্ণ হাতিয়ার হয়ে উঠেছে। প্রাপ্ত ফলাফলগুলি পদার্থ বিজ্ঞানের জন্য খুব কম গুরুত্বপূর্ণ ছিল না৷
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির সুবিধা কী? নতুন উপাদানের সাহায্যে, অত্যন্ত নির্দিষ্ট কোষ এবং সাবমাইক্রোস্কোপিক উপাদানগুলিকে আলাদা করা সম্ভব হয়েছে। একটি ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোস্কোপ আপনাকে পৃথক অণু সনাক্ত করতে দেয়। বিভিন্ন ধরণের রঞ্জক আপনাকে একই সময়ে বেশ কয়েকটি উপাদান সনাক্ত করতে দেয়। যদিও সরঞ্জামগুলির স্থানিক রেজোলিউশনটি বিচ্ছুরণের সীমা দ্বারা সীমাবদ্ধ, যা ঘুরে, নমুনার নির্দিষ্ট বৈশিষ্ট্যের উপর নির্ভর করে, এই স্তরের নীচে অণুগুলির সনাক্তকরণও বেশ সম্ভব। বিভিন্ন নমুনা বিকিরণের পরে অটোফ্লোরেসেন্স প্রদর্শন করে। এই ঘটনাটি পেট্রোলজি, উদ্ভিদবিদ্যা, অর্ধপরিবাহী শিল্পে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়।
বৈশিষ্ট্য
প্রাণীর টিস্যু বা প্যাথোজেনিক অণুজীবের অধ্যয়ন প্রায়শই হয় খুব দুর্বল বা খুব শক্তিশালী অ-নির্দিষ্ট অটোফ্লুরোসেন্স দ্বারা জটিল। যাইহোক, মধ্যে মানগবেষণা একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যে উত্তেজিত এবং প্রয়োজনীয় তীব্রতার হালকা প্রবাহ নির্গতকারী উপাদানগুলির উপাদানগুলির মধ্যে ভূমিকা অর্জন করে। ফ্লুরোক্রোমগুলি রঞ্জক হিসাবে কাজ করে যা কাঠামোর সাথে স্ব-সংযুক্ত করতে সক্ষম (অদৃশ্য বা দৃশ্যমান)। একই সময়ে, তারা লক্ষ্য এবং কোয়ান্টাম ফলনের ক্ষেত্রে উচ্চ নির্বাচনীতার দ্বারা আলাদা।
প্রাকৃতিক এবং সিন্থেটিক রংয়ের আবির্ভাবের সাথে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়ে উঠেছে। তাদের নির্দিষ্ট নির্গমন এবং উত্তেজনার তীব্রতা প্রোফাইল ছিল এবং নির্দিষ্ট জৈবিক লক্ষ্যমাত্রা ছিল।
স্বতন্ত্র অণুর সনাক্তকরণ
প্রায়শই, আদর্শ পরিস্থিতিতে, আপনি একটি একক উপাদানের উজ্জ্বলতা নিবন্ধন করতে পারেন। এটি করার জন্য, অন্যান্য জিনিসগুলির মধ্যে, যথেষ্ট কম ডিটেক্টর শব্দ এবং অপটিক্যাল ব্যাকগ্রাউন্ড নিশ্চিত করা প্রয়োজন। একটি ফ্লুরোসেসিন অণু ফটোব্লিচিংয়ের কারণে ধ্বংস হওয়ার আগে 300,000 ফোটন পর্যন্ত নির্গত করতে পারে। 20% সংগ্রহের হার এবং প্রক্রিয়া দক্ষতার সাথে, তারা প্রায় 60 হাজার
পরিমাণে নিবন্ধিত হতে পারে
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি, অ্যাভাল্যাঞ্চ ফটোডিওড বা ইলেকট্রন গুণনের উপর ভিত্তি করে, গবেষকদের সেকেন্ডের জন্য পৃথক অণুর আচরণ পর্যবেক্ষণ করতে দেয়, এবং কিছু ক্ষেত্রে মিনিট।
কঠিনতা
মূল সমস্যাটি হল অপটিক্যাল ব্যাকগ্রাউন্ড থেকে শব্দ দমন করা। ফিল্টার এবং লেন্স নির্মাণে ব্যবহৃত অনেক উপকরণ কিছু অটোফ্লুরোসেন্স প্রদর্শন করে, প্রাথমিক পর্যায়ে বিজ্ঞানীদের প্রচেষ্টা জারি করার উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করা হয়েছিল।কম ফ্লুরোসেন্স সহ উপাদান। যাইহোক, পরবর্তী পরীক্ষাগুলি নতুন সিদ্ধান্তের দিকে পরিচালিত করে। বিশেষ করে, মোট অভ্যন্তরীণ প্রতিফলনের উপর ভিত্তি করে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি কম পটভূমি এবং উচ্চ উত্তেজনা আলোর আউটপুট অর্জন করতে পাওয়া গেছে।
মেকানিজম
মোট অভ্যন্তরীণ প্রতিফলনের উপর ভিত্তি করে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির নীতিগুলি হল দ্রুত ক্ষয়প্রাপ্ত বা অ-প্রচারকারী তরঙ্গ ব্যবহার করা। এটি বিভিন্ন প্রতিসরণ সূচক সহ মিডিয়ার মধ্যে ইন্টারফেসে উদ্ভূত হয়। এই ক্ষেত্রে, আলোর মরীচি একটি প্রিজমের মধ্য দিয়ে যায়। এটির একটি উচ্চ প্রতিসরণ সূচক রয়েছে৷
প্রিজম একটি জলীয় দ্রবণ বা নিম্ন প্যারামিটার গ্লাসের সংলগ্ন। যদি আলোর রশ্মি এটির দিকে এমন একটি কোণে নির্দেশিত হয় যা সমালোচনামূলক একের চেয়ে বড়, তবে রশ্মিটি ইন্টারফেস থেকে সম্পূর্ণরূপে প্রতিফলিত হয়। এই ঘটনাটি, ঘুরে, একটি অপ্রচারক তরঙ্গের জন্ম দেয়। অন্য কথায়, একটি ইলেক্ট্রোম্যাগনেটিক ফিল্ড তৈরি হয় যা 200 ন্যানোমিটারেরও কম দূরত্বে একটি নিম্ন প্রতিসরণ সূচক সহ একটি মাধ্যম ভেদ করে৷
একটি অ-প্রচার তরঙ্গে, আলোর তীব্রতা ফ্লুরোফোরকে উত্তেজিত করার জন্য যথেষ্ট হবে। যাইহোক, এর ব্যতিক্রমী অগভীর গভীরতার কারণে, এর আয়তন খুব ছোট হবে। ফলাফল হল একটি নিম্ন-স্তরের পটভূমি৷
পরিবর্তন
মোট অভ্যন্তরীণ প্রতিফলনের উপর ভিত্তি করে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি এপি-ইলুমিনেশনের মাধ্যমে উপলব্ধি করা যেতে পারে।এর জন্য বর্ধিত সংখ্যাসূচক অ্যাপারচার সহ লেন্স প্রয়োজন (অন্তত 1.4, তবে এটি 1.45-1.6 এ পৌঁছানো বাঞ্ছনীয়), সেইসাথে যন্ত্রের আংশিকভাবে আলোকিত ক্ষেত্র। পরেরটি একটি ছোট স্পট দিয়ে অর্জন করা হয়। বৃহত্তর অভিন্নতার জন্য, একটি পাতলা রিং ব্যবহার করা হয়, যার মাধ্যমে প্রবাহের অংশ অবরুদ্ধ হয়। একটি সমালোচনামূলক কোণ পাওয়ার জন্য যার পরে সম্পূর্ণ প্রতিফলন ঘটে, লেন্স এবং মাইক্রোস্কোপ কভার গ্লাসে নিমজ্জন মাধ্যমটির উচ্চ স্তরের প্রতিসরণ প্রয়োজন৷
