এন্টারোব্যাকটেরিয়া এবং কিছু ভাইব্রিওসের ডিফারেনশিয়াল নির্ধারণে, ভোগেস-প্রসকাউয়ার প্রতিক্রিয়া একটি বিশেষ স্থান দখল করে। পরীক্ষাটি অ্যাসিটোইন গঠনের জন্য গ্লুকোজ গাঁজন করার জন্য ব্যাকটেরিয়ার ক্ষমতার উপর ভিত্তি করে।
গবেষণা প্রক্রিয়ার সারাংশ
মাইক্রোবায়োলজিতে, ভোগেস-প্রসকাউয়ার প্রতিক্রিয়া প্রায়শই এন্টারোব্যাকটেরিয়া (ছদ্ম টিউবারকুলোসিস এবং এন্টারোকোলাইটিসের প্যাথোজেন সহ), ইশেরিচিয়া কোলাই এবং স্পোর-গঠনকারী অ্যারোবসের ইয়ার্সিনিয়া পরিবারের মধ্যে পার্থক্য করতে ব্যবহৃত হয়। নির্দিষ্ট রিএজেন্ট যোগ করা হলে মাধ্যমটিকে রঙ করার মাধ্যমে ফলাফলটি কল্পনা করা হয়।
এই পরীক্ষাটি IMViC সিরিজের (Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate এর সংক্ষিপ্ত রূপ) - ডিফারেনশিয়াল সংজ্ঞা সহ সনাক্তকরণ পরীক্ষার একটি গ্রুপ:
- ইন্ডোল সহ, ইনডোলে ট্রিপটোফানের ভাঙ্গনের উপর ভিত্তি করে, একটি কোভাকস বা এহরলিচ রিএজেন্টের উপস্থিতিতে ব্যবহৃত হয়;
- ব্যবহার করছেমিথাইলরথ, বা মিথাইল রেড, যা গ্লুকোজ বিপাকের ফলে একটি প্রদত্ত পিএইচ সনাক্ত করে;
- এসিটাইল-মিথাইলকারবিনল সনাক্তকরণের জন্য Voges-Proskauer প্রতিক্রিয়া;
- মাধ্যমের ক্ষারকরণের ফলে রঙ পরিবর্তনের সাথে সাইট্রেটের ব্যবহার।
এই প্রক্রিয়াটির সারমর্ম হল অক্সিজেনের উপস্থিতিতে কস্টিক পটাশের সাথে তাদের দ্বারা গঠিত অ্যাসিটোইনের মিথস্ক্রিয়ার কারণে নির্ণয় করা ব্যাকটেরিয়াগুলির উপস্থিতির দৃশ্যায়ন। Acetyl-methylcarbinol diacetyl-এ জারিত হয়, যা একটি উজ্জ্বল লাল বা গোলাপী যৌগ গঠন করে। কস্টিক পটাশ যোগ করার আগে আলফা-ন্যাপথল প্রবর্তন করে পরীক্ষার সংবেদনশীলতা বাড়ান।
পরীক্ষা সেটিং
ভোজেস-প্রসকাউয়ার প্রতিক্রিয়ার গঠনে অণুজীবের প্রাথমিক চাষাবাদ জড়িত। ক্লার্কের ডিফারেনশিয়াল ডায়াগনস্টিক মাধ্যমে একটি বিশুদ্ধ সংস্কৃতি বপন করা হয়, যার একটি ভিন্নতা হল ক্লার্কের ঝোল (আগার-আগার যোগ না করে)। হয় রেডিমেড মাধ্যম ব্যবহার করা হয়, অথবা স্বাধীনভাবে প্রস্তুত করা হয়। উপাদানের মধ্যে রয়েছে:
- 5g পেপটোন;
- 5g গ্লুকোজ;
- 5g ডিবাসিক পটাসিয়াম ফসফেট;
- 1L পাতন।
অধ্যয়নের সময়, সংস্কৃতিটিকে একটি তরল মাধ্যমে জীবাণুমুক্ত ব্যাকটিরিওলজিকাল লুপ দিয়ে টিকা দেওয়া হয়। পরিমাণ - একটি টেস্টটিউব প্লাস কন্ট্রোলে 5 মিলি। ইনকিউবেশন দুই দিনের জন্য 35-37 ডিগ্রি তাপমাত্রায় বাহিত হয়। এরপরে, ভোগেস-প্রসকাউয়ার প্রতিক্রিয়ার একটি অধ্যয়ন ধাপে ধাপে করা হয়:
- 2, 5 মিলি ব্রোথ কালচার একটি জীবাণুমুক্ত টিউবে স্থানান্তরিত হয়।
- ছয় ফোঁটা আলফা-ন্যাপথল যোগ করুন (৫% অ্যালকোহল সলিউশন)।
- ৪০% যোগ করুন0.1 মিলি পরিমাণে কস্টিক পটাসিয়ামের দ্রবণ, বা দুই ফোঁটা।
- টেস্টটিউবটি আলতো করে ঝাঁকিয়ে নাড়াচাড়া করা হয়।
- পরীক্ষা শুরুর 15 মিনিট পরে ফলাফলের মূল্যায়ন করুন।
একটি বিকল্প পরীক্ষার পদ্ধতি হল রাতারাতি ইনকিউবেশন, যার সময় কমিয়ে ১৮ ঘণ্টা বা একদিন পর্যন্ত করা হয়। এই পদ্ধতির পাশাপাশি, একটি এক্সপ্রেস পরীক্ষাও ব্যবহার করা হয়: একটি সংস্কৃতিকে একটি লুপে 2 মিলি মাধ্যমের মধ্যে প্রবর্তন করা হয়, প্রায় চার ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়, তারপরে বিকারকগুলি 2-3 ড্রপের সমান পরিমাণে যোগ করা হয়, মিশ্রিত করা হয় এবং দশ মিনিট পর ফলাফল মূল্যায়ন করা হয়।
নিয়ন্ত্রণ হল নিউমোনিয়া ক্লেবসিয়েলা নিউমোনিয়ার অন্যতম কারণ - স্ট্রেন atcc 13883.
ফলাফলের মূল্যায়ন
রিএজেন্টগুলি যোগ করার পরে প্রয়োজনীয় সময়ের পরে (5 থেকে 15 মিনিটের মধ্যে), একটি চেরি-লাল রঙ একটি উচ্চারিত ইতিবাচক প্রতিক্রিয়া সহ লাল এবং গোলাপী - একটি দুর্বল ইতিবাচক প্রতিক্রিয়া সহ পর্যবেক্ষণ করা উচিত। নেতিবাচক ফলাফল হিসেবে কোনো পরিবর্তন রেকর্ড করা হয়নি।
একটি দ্রবণে অতিরিক্ত কস্টিক পটাশ একটি ইতিবাচক প্রতিক্রিয়ার অনুকরণ করতে পারে, একটি তামার রঙে দাগ পড়ে। এই ক্ষেত্রে, পরীক্ষিত উপনিবেশের নেতিবাচক প্রতিক্রিয়া রেকর্ড করা উচিত। এছাড়াও, কপার স্টেনিং এমন ক্ষেত্রে দেখা যায় যেখানে রিএজেন্টগুলি প্রবর্তনের এক ঘন্টা পরে মূল্যায়ন দেওয়া হয়৷
ফলাফলটি মূল্যায়ন করার সময়, এটি অবশ্যই বিবেচনায় নেওয়া উচিত যে অধ্যয়ন করা অণুজীবগুলির দীর্ঘায়িত চাষ (তিন দিনের বেশি) মাধ্যমের অম্লকরণের দিকে পরিচালিত করে, যা অধ্যয়নের ভুল ফলাফলের দিকে নিয়ে যেতে পারে। প্রতিক্রিয়া হালকা ইতিবাচক বা হতে পারেমিথ্যা নেতিবাচক।
পরীক্ষা বিকারকদের জন্য প্রয়োজনীয়তা
Voges-Proskauer reagents অবশ্যই সঠিক ঘনত্ব, উচ্চ বিশুদ্ধতা এবং স্থিতিশীলতার মতো প্রয়োজনীয়তা পূরণ করতে হবে, যা সঠিক স্টোরেজের মাধ্যমে অর্জন করা হয়।
ব্যবহারের জন্য প্রস্তুত পরীক্ষার কিটগুলিতে সাধারণত 100 বা তার বেশি ব্যবহারের জন্য বিকারক থাকে এবং প্লাস্টিক বা টিন্টেড কাঁচের শিশিতে আসে। মান প্রাসঙ্গিক ডকুমেন্টেশন দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয়।
